【作者】龙云凤 吴莹莹 贾薇 杨海芮 白旭 张劲松 杨焱 张赫男 栾军 高玲 王毅谦 汪雯翰
【机构】江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 上海市农业科学院食用菌研究所农业部南方食用菌资源利用重点实验室国家食用菌工程技术研究中心国家食用菌加工技术研发分中心上海市农业遗传育种重点开放实验 药明康德新药开发有限公司 石河子大学生命科学学院
【摘要】利用细胞克隆实验、划痕实验和alamarBlueTM细胞活力测定实验评价樟芝皿培菌丝体醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相对SPCA-1非小细胞肺癌的体外抑制作用,并进一步利用流式细胞术Annexin VFITC（fluorescein isothiocyanate）/PI（propidium iodide）双染测定细胞早期凋亡率、流式细胞术2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯（2′,7′-dichlorofluorescindiacetate,H2DCFDA）单染测定ROS（reactive oxygen species）释放量、流式细胞术PI单染测定细胞周期变化和ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、p53和PARP的表达,探讨樟芝皿培菌丝体醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相抑制SPCA-1增殖的作用机理。研究结果表明:樟芝皿培菌丝体醇提物石油醚萃取相和氯仿萃取相均能抑制SPCA-1细胞克隆的形成、迁移和增殖,石油醚萃取相的活性明显好于氯仿萃取相;石油醚萃取相通过促进SPCA-1释放ROS来诱发线粒体依赖性早期凋亡的发生,并使促凋亡蛋白Caspase-3和p53表达上升,同时抑制蛋白PARP表达,从而发挥其抑制SPCA-1肺癌细胞增殖的作用;而氯仿萃取相主要通过将SPCA-1细胞阻滞在S期抑制其增殖。
【关键词】克隆形成; 迁移; 活性氧; 凋亡; 细胞周期; Caspase-3; p53; PARP;