【作者】欧阳萍兰 李琼洁 郭丽琼 林俊芳 叶志伟 魏韬 郑倩望 伍土恒 罗润
【机构】华南农业大学食品学院&食品生物技术研究所 广东省微生态制剂工程技术研究中心
摘要：对金针菇(Flammulina velutipes)冷诱导相关的组氨酸激酶基因HK1和HK2构建了基因组编辑(CRISPR/Cas9)pgfvs-Cas9-HK1-gRNA和pgfvs-Cas9-HK2-gRNA表达载体,探索了金针菇菌丝体及原生质体对潮霉素的最低敏感浓度,利用PEG介导的方法将表达载体pgfvs-Cas9-HK1/HK2-gRNA转化金针菇原生质体,经潮霉素筛选后的拟转化子再进行PCR鉴定。结果显示:金针菇菌丝体及原生质体对潮霉素的最低敏感浓度均为50μg/mL;经潮霉素筛选后的部分拟转化子成功扩增出Cas9的部分片段,携带有HK1、HK2基因载体的Cas9蛋白基因成功整合到了金针菇的基因组中,两个表达载体转化率分别为24.1%和12.5%。
基金：国家自然科学基金项目(31372116、31572178)； 广东省现代农业食用菌体系项目(2016LM1125、2016LM1126)；
关键词：金针菇; CRISPR/Cas9; PEG介导的转化;