【作者】陈清清 孙炳剑 袁虹霞 施艳 李洪连
【机构】河南农业大学小麦玉米作物学国家重点实验室河南粮食作物协同创新中心
【摘要】由索氏平脐蠕孢Bipolaris sorokiniana引起的小麦根腐病,常和其他土传真菌病害混合发生,传统的症状鉴别方法很难区分,导致病害防控难度增加。为建立病菌实时荧光定量检测体系,根据ITS序列设计引物,筛选出1对特异性引物BS‐F/R,扩增片段大小为280bp。以菌丝DNA为标准品构建实时荧光定量标准曲线,并对其灵敏度、特异性、可重复性进行评价。结果表明,建立的实时荧光定量PCR检测方法速度快,灵敏度高,特异性强,重复性好。构建的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,溶解曲线的吸收峰单一,扩增效率良好。利用该定量检测体系,可以检测出田间小麦样品中52.8fg/μL的病菌DNA。
【基金】国家“十二五”粮食丰产科技工程项目(No.2012BAD04B07)； 中国科学院重点部署项目(No.CXJO120111)； 河南省农业科技创新项目(No.2012-06)；
【关键词】土传病害; 菌丝DNA; ITS序列; 实时荧光定量PCR; 小麦根腐病菌; 定量检测;