【作者】刘莉 肖招燕 郭丽琼 林俊芳 尤琳烽 廖静文
【机构】华南农业大学食品学院华南农业大学生物质能研究所
【摘要】对猴头菌Hericium erinaceus原生质体制备的各种因素进行比较研究,结果表明,猴头菌原生质体制备的最佳体系为:液体培养5d的猴头菌丝,以0.6mol/L KCl作为稳渗剂,加入含1.0%纤维素酶+1.0%蜗牛酶+1.0%溶壁酶的复合酶,在30℃酶解猴头菌丝3h时,原生质体得率达到3.0×106个/mL。潮霉素敏感性测试表明,猴头菌在PDSA固体培养基上的潮霉素最低筛选浓度为60μg/mL。采用PEG介导的原生质体法,将质粒pBgGI‐hph(含有灵芝gpd1‐Gl启动子和潮霉素抗性基因hph)转化猴头菌原生质体,经潮霉素初步筛选以及PCR鉴定,表明有4株猴头菌拟转化子的基因组扩增出hph基因;转化子经过多次转接后进行Southern杂交验证,结果表明4个转化子的基因组中均稳定整合了hph抗性基因。
【基金】国家自然科学基金(No.31071837； No.31272217)“食用真菌组合表达紫杉醇及其中间产物的基础研究”和“食用真菌组合表达白藜芦醇的研究”；
【关键词】猴头菌; 原生质体制备; PEG介导转化;