【作者】李志勇 刘磊 曹志艳 董立 董志平
【机构】河北省农林科学院谷子研究所河北农业大学生命科学学院
【摘要】漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,与植物病原菌致病性、黑色素合成及降解木质素等方面相关。为明确漆酶在新月旋孢腔菌的催化作用及其催化活性,以2,2′-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)(简称ABTS)为底物,利用分光光度计在420nm下测定胞内漆酶活力,结果表明酶活测定最佳反应条件为缓冲液pH2.8、Cu2+浓度500μmol/L和0.6mmol/LABTS。根据漆酶Cu2+结合保守结构域设计了1条引物,对新月旋孢腔菌漆酶基因进行克隆,并通过RACE技术克隆了其全长cDNA序列。开放阅读框长1,803bp,编码600个氨基酸,通过生物信息学分析,发现新月旋孢腔菌漆酶基因与其他植物病原菌漆酶基因具有较高的同源性,新月旋孢腔菌漆酶基因编码的蛋白含有4个铜离子结合位点保守域及8个潜在N-糖基化位点,并且氮端存在信号肽序列。在新月旋孢腔菌漆酶基因启动子区发现1个金属响应原件(MRE)、1个压力响应原件(STRE)、2个CreA结合位点和4个氮因子结合位点。
【基金】谷子产业技术体系(No.CARS-07-12.5-A8)；
【关键词】新月旋孢腔菌; 胞内漆酶活性; 漆酶基因; 基因克隆;