【作者】张桂敏 曾毓芳 陈雅兰 屠俊 何家亨 马立新
【机构】湖北大学生命科学学院
【摘要】将一段含有质粒ColE1复制起始区(ori)和氨苄青霉素抗性基因(bla)的DNA片段插入到酿酒酵母rDNA片段中部的EcoRI或HpaI位点之间,在pYES2载体的基础上构建了两个rDNA介导的酿酒酵母稳定表达载体pHBM367E或pHBM367H。将黑曲霉糖化酶基因导入载体pHBM367H,获得表达载体pHBM166。为生物安全性的考虑,pHBM166经HpaI酶切去掉2.2kb的ColE1ori和bla片段后转化酿酒酵母Y33菌株,获得不含任何抗生素抗性基因的工程菌。随后,对糖化酶基因在酿酒酵母中的表达、稳定性进行了分析,结果显示,rDNA介导的糖化酶基因在酿酒酵母中的表达呈现不同的剂量效应,挑选高表达的菌株传80代之后仍能保持其产糖化酶的稳定性。
【基金】国家自然科学基金(No.30600014)； 湖北省自然科学基金(No.2008CDB058)； 湖北省教育厅重点项目(No.D20101001)； 武汉市科技攻关计划(No.201021037380-3)；
【关键词】酿酒酵母; rDNA介导; 糖化酶; 生物安全性; 剂量效应;