【作者】郝帅 郭建强 李运敏 岳丽丽 矫庆华
【机构】中国科学院微生物研究所三元基因有限公司VA Medical Centre 111C5 Department of Medicine University of Californiaat San Francico 4150 Clement StreetSan FranciscoCA 94121USA北京100080中国科学院研究生院北京100049北京100083
【摘要】利用毕赤酵母的质粒载体pPIC9K将极端耐热古菌Pyrococcusfuriosus的超耐热酸性α-淀粉酶(Amy)基因转化到多型汉逊酵母HP-6中,获得重组汉逊酵母。经过甲醇进行诱导,表达产物的酶活性检测和SDS-PAGE电泳,证明α-淀粉酶(Amy)在多型汉逊酵母中利用AOX1启动子和α-因子信号肽有效表达并分泌到胞外。该酶的最适反应温度为90～100℃,最适作用pH为4.0～5.0,较之重组毕赤酵母的最适作用pH还低0.5。此外与毕赤酵母的重组蛋白相比,重组汉逊酵母α-淀粉酶不仅菌株筛选简便、周期短,而且具有更容易筛选到高拷贝转化子以及适用于大规模工业发酵等优点。
【基金】国家科技攻关计划(2001BA708B03-03)；
【关键词】Pyrococcusfuriosus; AOX1启动子; MOX启动子; α-因子信号肽;