【作者】刘守安 李多川 张燕 郭芳先 俄世瑾
【机构】山东农业大学环境生物系 山东农业大学环境生物系 泰安271018
【摘要】嗜热毛壳菌ChaetomiumthermophilumCT2可产生具有重要工业生产价值的纤维素酶类。RT-PCR扩增cbh1成熟蛋白的编码基因,利用基因重组的方法构建可在毕赤酵母分泌表达系统中表达纤维二糖水解酶的重组表达载体,并转化毕赤酵母得到重组子。在毕赤酵母醇氧化酶AOX1基因启动子的作用下,重组蛋白得到高效表达,小规模发酵量达1.42mg/mL。表达蛋白分泌到培养基中,分子量约80kD;以脱脂棉为底物测得酶活为21U/mL。表达蛋白在60℃稳定,70℃保温60分钟仍保持90%的酶活力,具有较高的热稳定性。
【基金】国家863计划资助项目(2003AA241162)； 国家自然科学基金(30270013,30170013)；
【关键词】纤维素酶; 整合表达; 羧甲基纤维素;
图2 pPIC9K/cbh1重组表达质粒的酶切鉴定
培养液中的酶蛋白量为 1.42 mg/mL。
重组纤维二糖水解酶Ⅰ的温度稳定性