【作者】周凯松 常宁 彭俊峰 张晗星 张长铠
【机构】山东大学微生物技术国家重点实验室 山东大学微生物技术国家重点实验室 济南250100
【摘要】采用QuickPrepmicromRNAPurification试剂盒从新鲜金针菇子实体中快速提取、纯化mRNA,TimeSavercDNASynthesis试剂盒逆转录成cDNA分子后,通过在cDNA分子两端加上EcoRⅠ/NotⅠ接头,在T4多核苷酸激酶的作用下磷酸化,与表达载体λZAPExpressPredigestedVector连接,然后用包装蛋白在体外包装连接产物,感染E.coliXL1-BlueMRF捁菇ǔ杀泶颿DNA文库。经检测:文库滴度为4.0×106pfu/ml,文库扩增后,滴度达2.0×1010pfu/ml,重组率为90%,cDNA分子长度在0.3-3.5Kb范围。应用原位免疫杂交,初步筛选出火菇素相关基因的阳性克隆。
【基金】教育部博士点基金(No. 2000042212)；
【关键词】滴度; 重组率; 免疫筛选;