【作者】李钟庆；元伟；
【机构】中国科学院微生物研究所；中国科学院微生物研究所；北京；
【摘要】本文报告用液氮超低温(-196℃)冻结和融化后,对酵母菌的影响。34种酵母菌经慢速(冷却速度为1℃/min)冻结后细胞成活率普遍高于快速(冷却速度为450℃/min)冻结。10%甘油和10%二甲亚砜比水在冻结中呈现出显著的保护作用。冻结保藏4个月后,细胞成活率都在11%以上,最高达97%,平均70.4%,而水,最低者仅0.4%,最高87%,平均46.5%。所观察的白地霉 Geotrichum candidum As 2.361,椭圆酿酒酵母 Saccharomyces cere-visiae var.ellipsoideus AS 2.541,八孢裂殖酵母 Schizosaccharomyces octosporus AS 2.1148,其细胞在冻结过程中的形态,最初质壁分离,继之整个细胞收缩,而融化后则可复元.解脂假丝酵母 Candida lipolytica AS 2.1207和2.1405经冻结48小时以上,融化后的细胞悬液直接接种培养后检测脂肪酶活力;酿酒酵母 Saccharomyces cerevtsiae AS 2.399和椭圆酿酒酵母 As 2.541冻结48小时后乙醇发酵力;异常汉逊酵母 Hansenula auomala AS 2.300和 AS 2.470冻结后形成乙酸乙酯的能力,都无明显的减退,而且以甘油作保护剂的细胞,较未经冻结者呈现出稍强的活力。就代谢产物而言,用气相色谱法分析发酵液,乙醇或乙酸乙酯都是很纯的终产物。嗜渗压的固囊酵母 Citeromyces matritensis AS 2.1401和汉逊德巴利酵母 Debaryomyceshansenii AS 2.45冻结后的细胞耐 NaCl 的能力无改变.冷冻真空干燥法保藏菌种,适合的菌类较广,是久经考验的方法。但是对于酵母菌冻干后细胞成活率平均为8.6%,而超低温冻结24小时细胞成活率平均为86.7%,大了10倍。
【关键词】液氮；超低温冻结；融化；存活力；成活率；