【作者】姜宁宋春艳刘建雨谭琦章炉军尚晓冬
【机构】上海海洋大学食品学院上海市农业科学院食用菌研究所国家食用菌工程技术研究中心
摘要：香菇Lentinula edodes是世界第二大食药用真菌,随着其全基因组测序的完成,功能基因组学研究也逐渐展开,建立稳定的香菇转化体系是目前的研究热点。本文将探索以农杆菌为介导的遗传转化体系在香菇中进行随机插入突变的转化效率以及稳定性。构建的质粒p YN6982以潮霉素抗性基因hyg作为筛选标记基因,以增强型荧光蛋白基因egfp作为报告基因,以农杆菌EHA105和LBA4404为介导,同时转化了孢子单核体、原生质体单核体和双核体菌株。结果表明采用小米粒培养基进行菌丝培养和转化,经潮霉素抗性筛选,以及5代传代后,对转化子中的hyg和egfp基因进行PCR扩增和测序,验证了转化子的遗传稳定性。经过荧光显微观察表明,EGFP在转化子中可稳定表达。本研究探索出一种采用小米粒培养基培养菌丝并进行转化的新方法,建立了稳定的农杆菌介导的香菇遗传转化体系,为进一步开展香菇的基因功能研究奠定了良好的基础。
基金：现代农业产业技术体系建设专项资金资助(CARS24)； 上海科技兴农重点攻关项目[沪农科攻字(2015)第5-1号]~~；
关键词：香菇; 单核体菌丝; 农杆菌; 潮霉素; 绿色荧光蛋白;