【作者】郭丽琼 王秀旭 柳永 舒薇 林俊芳
【机构】华南农业大学食品学院生物工程系华南农业大学测试中心华南农业大学食品学院生物工程系 华南农业大学生物质能研究所广州 510640
【摘要】利用从香菇菌丝体中克隆的启动子片段gpd-Le(613bp)和ras-Le(715bp)分别连接于报告基因gfp(绿色荧光蛋白基因)的上游,构建了启动子功能活性检测表达质粒pLg-gfp和pLr-gfp。采用PEG介导法把表达质粒pLg-gfp和pLr-gfp分别与辅助质粒pCc1001(含有trp1基因)共转化进色氨酸营养缺陷型的灰盖鬼伞粉孢子的原生质体中。经过选择培养基筛选、假定转化子的分子鉴定以及GFP荧光检测。结果表明:香菇gpd-Le启动子在灰盖鬼伞的菌丝中具有较强驱动外源gfp基因表达的活性,在荧光显微镜和共聚焦显微镜下观察到gfp基因表达的绿色荧光。而香菇ras-Le启动子没有检测到有驱动外源gfp基因表达的活性。
【基金】国家自然科学基金(No．30371000,39960050,30060054)； 广东省科技攻关(No．2004820101001)； 广东省自然科学基金(No．5006680,032239)；
【关键词】香菇; 启动子活性; 灰盖鬼伞; 共转化; gfp基因;