基于适体技术的桔青毒素检测方法的建立

【作者】张亚军 金庆日 邵春艳 桂海娈 方维焕 杨梦华 宋厚辉
【机构】浙江农林大学动物科技学院浙江大学动物科学学院
摘要：桔青毒素(citrinin,CTN)是以玉米、谷物、奶酪等为主要成分的食品和动物饲料中常见的、由桔青霉菌产生的酮类真菌毒素,可引起人和动物的慢性中毒或癌症,一直缺少灵敏的快速检测方法。本文通过指数富集适体系统进化技术(简称SELEX)对可能与CTN结合的特异性适体进行了筛选,经过15轮循环,得到17条适体。通过二级结构分析、亲和力检测发现适体13(Apt-13)对CTN有较好的亲和度,解离常数Kd为0.06μmol/L。进一步利用非荧光标记染料Pico Green,利用其与双链DNA结合的原理,建立了桔青毒素非标记荧光检测方法,30min完成检测,最低检测限达到国家标准(50ppb)且与其他毒素无交叉反应。本研究建立的基于适体的桔青毒素检测技术成本低,可以替代传统的基于抗体的检测方法,为霉菌毒素的精准检测技术的开发提供了实验证据。
基金：国家高技术研究发展计划(863计划)(2012AA101602)； 浙江省科学技术厅重大科技专项重大农业项目(2014C02003)； 浙江农林大学人才项目(2011FR025； 2012FR047； 2013FR012； 2013FR054)~~；
关键词：桔青毒素; 指数富集适体系统进化技术; 适体; 亲和度;