双孢蘑菇如何进行菌种制备？

      (一)孢子的采收与培养：采集孢子用孢子采集较好、分离对象应选取适于本地区生长的优良品系。在第一第二潮菇中、选择生长正常、出菇整齐、无病虫害、菇形圆整、白色、盖厚、柄粗的单生感作种菇，采下的种菇切去根部，置无菌箱内，浸入0.1%升汞溶滚中消毒的1分钟，用无菌水冲洗，再用无菌纱布吸干表面水分，然后插入孢子收集器的三角架上，盖上有孔钟罩，置22~24℃下培养。待培养皿内呈咖啡色时， 用无菌水稀释， 用无菌注射针管吸取孢子液，在每支PDA培养基试管中滴入1~2滴，置24℃下培养9~12天，可见呈星芒状的菌落长出，即为蘑菇菌丝。
      (二)单菌落的挑选；由孢子萌发的菌落，当肉眼可见时即需挑出，移至斜面培养基上，待菌落长到蚕豆大小时进行选择。蘑菇菌丝有气生型与匍匐型两类。气生型菌落，选菌丝尖端生长挺直，生长势强，分支清晰，基内菌丝旺盛且长得深的菌落。挑选出的菌种在20~22摄氏度继续培养，然后分管，待菌丝长到斜面的1/2时，任取两支作高温试验，放35℃下24小时，然后再放回到正常温度下培养，观察菌丝恢复生长情况，以依复生长快、倒伏发黄少的为好。待菌丝发满试管斜面后即可使用。在作高温试验的同时，取一部分菌种接人原种瓶中，以培养料转红棕色，菌丝尖端生长挺直粗壮、排列稀疏与清晰、呈扇形生长，长势强，培养料具蘑菇特有的香味者为好。匍匐型菌落，以白色绒毛状较好。用作大面积生产的菌种，除在母种、原种中作观察选择外，还必须做出菇鉴定，应选择吃料转色快、穿土性能强、出菇转潮快、产量高、品质优的做菌种。
      (三)原种、栽培种的制作：①粪草培养基——麦草菌种：取干麦草25千克、干粪25千克、石膏粉0.5千克，加水适量，进行堆制发酵，晒干备用。制种时，将发酵过的麦草切成长3厘米左右，取50千克草加石膏0.5千克，水80~90升(含水量65%~68%)，充分拌合，就地堆放1~2小时，让水透入料内后即可装瓶。装瓶时，用锥形木棒在料中央打1个洞直至接近瓶底。料装好后，塞上棉塞，进行灭菌。接原种是挑母种菌丝1小块，连同培养基放入粪草培养料瓶内，一般1支母种可接4~5瓶原种；接栽培种是用粪草原种作菌种，接入粪草或其他培养基中，一般1瓶原种可接50~60瓶栽培种。菌种接好后，置温度22~25℃、湿度65%左右中培养。②谷粒培养基一—谷粒菌种：取饱满小麦10千克，洗净，加水15升，煮沸15分钟。摊开晾凉。制种时取熟麦粒10千克，加石膏135克、碳酸钙35克，拌匀后装瓶、灭菌、冷却后接种，25℃左右培养。在培养过程中要经常摇动菌种瓶。③河泥牛粪培养基—河泥菌种：将湿河泥与经粉碎的干牛粪以1：1(体积比)混合，堆成馒头状自然发酵1周，然后摊开晒干。制种时用2%石灰清水拌料，含水量以手捏成，甩下能散开为宜，酸碱度调节到pH9，然后装瓶灭菌，冷却后接种、培养砻糠、河泥、猪牛粪培养基―一砻糠菌种：将河泥与猪牛粪按1：(体积比)混合堆积发酵，同时将若糠与猪牛粪也按1：1混合堆积发.然后再将两种发酵后的料按1：1混合。调节湿度和pH值至9，灭菌，冷却后接种培养。