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金针菇产植酸酶菌株的筛选及植酸酶基因区域的克隆刘世强　郭丽琼　林俊芳　郭安平　摘　要：从金针菇(Flammulina velutipes)7个菌株中筛选出1株高产植酸酶菌株.根据GenBank中植酸酶基因的保守区设计并合成一对特异性引物,以金针菇菌丝的总DNA为模板,通过PCR扩增,获得了一条长约790bp的片段.DNA序列测定结果表明,该片段长度为788bp,采用Blast软件进行序列比对发现,该片段与平田头菇(Agrocybe pediades)的植酸酶基因phy(GenBankAccession:CAC48160)编码的氨基酸具有64%的序列同源性.该片段含有2个内含子,含有植酸酶基因的活性位点高度保守序列(Active-site sequence)-RHGXRXPT[1]. 关键词：金针菇;植酸酶;筛选;克隆分类号：S646.150.1 　文献标识码：A 文章编号：1005-9873(2005)03-0001-06 The Screening of Flammulina velutipes Strain Producing Phytase and Cloning of Its Phytase Gene Region LIU Shi-qiang　 GUO Li-qiong　 LIN Jun-fang　 GUO An-ping　基金项目：国家自然科学基金资助项目"草菇冷冻胁迫诱导表达基因及其启动子的克隆分离"(编号:30060054)和"食用菌外源基因表达系统的建立"(编号:30371000)的部分研究内容作者简介：刘世强(1978-),男,2005年毕业于华南热带农业大学农学院作物遗传育种专业,硕士,主要从事食用菌的基因工程研究与开发,发表主笔论文1篇. 作者单位：刘世强（中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,海口,571701）　　　　　　郭丽琼（中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,海口,571701;华南农业大学食品学院生物工程系,广州,510640）　　　　　　林俊芳（中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,海口,571701;华南农业大学食品学院生物工程系,广州,510640）　　　　　　郭安平（中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,海口,571701）　参考文献： [1]Wodzinski RJ, Ullah AH. Advances in applied microbiology[J]. Phytase, 1996,42:263～302. [2]Schwarz G, Hoppe PP. Phytase enzyme to curb pollution from pigs and poultry[J]. Feed Magazine, 1992,22～26. [3]Lambrechts C, Boze H. Utilization of phytate by some yeast[J]. Biotechnology Letters, 1992,14(1):61～66. [4]Lei Xinggen,Ku PK, Miller ER, et al. Supplementing corn-soybean meal diets with microbial phytase P utilization by weanling pigs[J]. Animal Science, 1993,71:3368～3375. [5]Nagashima T, Tange T, Anazaws H. Dephosphorulation of phytate by using the Aspergillus niger phytase with a high affinity for phytate[J]. Appl Environ Microbial, 1999,65(10):4682～4684. [6]Sharma CB,Goel M, Irshad M. Myo-inositol hexaphosphate as a potential inhibitor of a-amylases of different origins[J]. Phytochemistry, 1978,17:201～204. [7]J.萨姆布鲁克D.w.拉赛尔(黄培堂译).分子克隆实验指南[M].北京:科学出版社,2002.26～27,96～99. [8]Tomschy A, Tessier M, Wyss M, et al. Optimization of the catalytic properties of Aspergillus fumigatus phytase based on the three-dimensional structure[J]. Protein Sci, 2002,9(7):1304～1311. [9]姚斌,张春义,王建华,等.产植酸酶的黑曲霉菌株筛选及其植酸酶基因克隆[J].农业生物技术学报,1998,6(1):1～6. [10]彭日荷,熊爱生,李贤,等.应用毕氏酵母高效表达耐高温植酸酶[J].生物化学与生物物理学报,2002,34(6):725～730. [11]Stahl CH, Wilson DB, Lei XG. Comparison of extracellular Escherichia coli AppA phytases expressed in Streptomyces lividans and Pichia pastoris [J]. Biotechnol Lett, 2003,25(10) :827～831. 食用菌学报 2005年第3期-HTM文件 No.1