香菇ras和gpd启动子的克隆与功能鉴定

香菇ras和gpd启动子的克隆与功能鉴定 于晓玲　 林俊芳　 郭丽琼　 王树昌　 摘　要：以香菇基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆了香菇1个ras启动子Lras,2个gpd启动子Lgpd1和Lgpd2.这3个启动子的大小分别为715bp、1056bp和611bp,与已报道的ras和gpd启动子的同源性很强.对这3个启动子的分析结果表明,它们都含有丰富的启动子顺式作用元件.将这些启动子片段分别与GUS基因连接构建了表达载体,并将这些表达载体导入草菇菌丝体中,检测其活性,最终显示3个片段都有启动GUS基因表达的能力,其中Lgpd1启动子活性最强,Lras启动子次之,Lgpd2最弱. 关键词：香菇;ras启动子;gpd启动子;原生质体转化;GUS基因 分类号：S646.120.36 　文献标识码：A 文章编号：1005-9873(2005)03-0015-06 Cloning and Characterization of ras and gpd Promoters from Lentinus edodes Yu Xiao-ling　 Lin Jun-fang　 Guo Li-qiong　 Wang Shu-chang基金项目：国家自然科学基金资助项目"抗冷冻蛋白基因遗传转化草菇的研究"(编号:39960050),"草菇冷冻胁迫诱导表达基因及其启动子的克隆分离"(编号:30060054),"食用菌外源基因表达系统的建立"(编号:30371000)和广东省自然科学基金资助项目"食用菌外源基因表达系统的建立"(编号:032239)的部分研究内容 作者简介：于晓玲(1979-),女,2004年毕业于华南热带农业大学作物遗传育种专业,硕士,助理研究员,主要从事基因工程与分子生物学研究. 作者单位：于晓玲（中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,热带生物技术研究所,海口,571101）　 　　　　　林俊芳（中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,热带生物技术研究所,海口,571101;华南农业大学食品学院生物工程系,广州,510640）　 　　　　　郭丽琼（中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,热带生物技术研究所,海口,571101;华南农业大学食品学院生物工程系,广州,510640）　 　　　　　王树昌（中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室,热带生物技术研究所,海口,571101）　 参考文献： [1]刘春如.香菇的分布概况及生物学特性[J].中国林副特产,2001,11(4):32～33. [2]曲章义,牛美娟,郭彩玲.香菇多糖抗肿瘤作用机理[J].中国食用菌,1997,16(5):3～5. [3]芮菁.香菇多糖的药理作用和临床应用概况[J].天津药学,2000,12(1):34～36. [4]Mooibroek H, Kuipers AGJ, Sietsma JH, et al. Introduction of hygromycin B resistance into Schizophyllum commune: Preferential methylation of donor DNA[J]. Mol Gen Genet, 1990,222:41～48. [5]Osamu Ishibashi, Kazuo Shishido. Nucleaotide sequence of a ras gene from the basidiomycete Coprinus cinereus [J]. Gene, 1993,125(2) :233～234. [6]Hori K, Kajiwara S, Saito T, et al. Cloning, sequence analysis and transcriptional expression of aras gene of the edible basidiomycete Lentinus edodes [J]. Gene, 1991,105(1) :91～96. [7]Challen MP, Bhattiprolu GR, Warner PJ. Cloning the Coprumus bilannatus TRP2 gene and it use as a selectable marker in transformation[J]. Mycology Research, 1994,98(2) :179～185. [8]Goodwen W, Pallas JA, Jenlins GI. Transcripts of a gene encoding a putative cell wall-plasma membrane linker protein are specifically cold-induced in Brassica napus [J ]. Plant Mol Biol, 1996,31:771～ 781. [9]Hirano T, Sato T, Yaegashi K, et al. Efficient transformation of the edible basidiomycete Lentinus edodes with a vector using a glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase promoter to hygromycin B resistance[J ].Molecular and General Genetics, 2000,263(6):1047～1052. [10]刘世强,杨丽卿,郭丽琼,等.草菇ras启动子区域的克隆及其序列分析[J].食用菌学报,2004,11(1):1～6. [11]温海洋,肖洪东,黄剑波,等.草菇种内原生质体融合育种研究[J].北方园艺,2000,3:48～49. [12]王春晖,喻初权,张志光.外源DNA片段导入草菇原生质体的研究[J].食用菌学报,1999,6(4):1～6. [13]张志光,李东屏,方芳.丝状真菌原生质体技术研究[J].湖南师范大学自然科学学报,1998,21(1):60～65. [14]李东屏,张志光,张天晓.草菇、银丝草菇原生质分离及再生试验[J].湖南微生物学通讯,1991,1(3):9～14. [15]储成才,陈帅,司丽珍.转基因表达的精细调控[J].杭州师范学院学报(自然科学版),2001,18(4):43～44. [16]郭丽琼,陈守才,林俊芳.食用菌遗传转化研究进展[J].食用菌学报,2001,8(4):47～53. 食用菌学报 2005年第3期-HTM文件 No.3