食用菌菌丝繁殖快,易变异,菌种保藏难度较大。现介绍几种效果很好而且简单易行的保藏新方法。
一: 斜面低温保藏法这是一种最简单的保藏法,即将生长旺盛无污染的斜面试管放入冰箱内,在4℃~6℃的低温下保藏,以后每隔2-3个月移接于新鲜的斜面培养基上,培养后再继续保藏(以补充菌丝的养分和水分,防止菌丝老化)。
二、液体石蜡保藏法:选用化学液体石蜡,高压灭菌后放入40℃恒温箱中数小时或干燥器中数日,用无菌吸管或注射器吸取液体石蜡,注入菌种试管。注入量应高出斜面尖端1厘米左右,塞上棉塞,用蜡封好,直立保藏在清洁、干燥、凉爽的低温处,可保藏5年左右。
三. 孢子保藏法:用2×0.5×0.8厘米经灭菌的滤纸条吸附上孢子,可参考孢子分离法,然后把带孢子的纸条放入无菌试管内,置干燥器内2—3天吸干水分,再改用胶塞。在冰箱或室温内可保存多年。
四. 菌丝球保藏法:常用经灭菌的生理盐水、无菌水、蒸馏水、营养液等装入试管约5毫升作媒介,把经过液体培养至对数生长期的菌丝球4—5个,移入媒介内,用胶塞封口,冰箱摄氏4度或室温可保存1—2年。
五. 液氮保藏法:常用经灭菌10%甘油蒸馏水或10%二甲基亚砜蒸馏水为保护剂,注入斜面母种管,刮下菌丝体成悬浮液或孢子液,吸取菌液0.5—0.8毫升注入已灭菌安瓿管,熔封管口,置液氮冷冻器内,每分钟降摄氏1度,1小时内使其温度降至摄氏负35度,其后迅速降至气相摄氏负150度,液相摄氏负196度保存。保存期可超过10年。
六、麸皮保藏法:称取一定量的麸皮加水或营养液后拌匀后拌匀即可使用。水、麸皮比例约为1:0.8。拌好的麸皮装入试管,高压灭菌后接入菌种,放在适温下培养。菌丝体发育好,将试管放入干燥室温下进行干燥。干燥后放在20℃以下干燥处保藏,可保藏3-5年时间。
七、生理盐水保藏法:将菌种接入马铃薯培养液中,每250毫升三角瓶装60毫升培养液,振荡培养或每天摇动5-10次,培养5-7天,然后将形成的菌丝球吸入装有5毫升无菌生理盐水的试管中,每管约移入4-5个菌丝球,塞上棉塞,用蜡封好管口,置低温下可保藏1年
八、麦粒保藏法:取优质小麦,淘洗后浸入20℃水中泡5小时,稍加晾干,装管。装入量以管长的1/4到1/3为宜,灭菌,趁热摇散,冷却后接入菌丝体,室温培养至大多数麦粒上出现稀疏菌丝时终止培养。置于25℃以下干燥处,可保藏1-2年。
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