真菌免疫调节蛋白基因LZ-8过表达载体的构建及转化灵芝原生质体的研究

【作者】孙墨可 张曼 田娟 李晓薇 李海燕 李玉
【机构】白城市农业科学院生物技术实验室 吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心 吉林农业大学食药用菌教育部工程研究中心
摘要：灵芝Ganoderma lingzhi是我国著名的药用真菌。但是,作为一种营养和保健价值都非常高的大型担子菌,灵芝还缺乏完善的转基因方法和安全转基因体系。本研究建立了免疫调节蛋白基因的过表达系统,并利用真菌特异性启动子GPD、终止子NOS和目的基因LZ-8构建真菌特异性双T-DNA表达载体p SB130NG-LZ8;利用溶壁酶提取灵芝原生质体,并用FDA染色法检测灵芝原生质体活性,原生质体成活率约为80%。通过PEG转化法对灵芝原生质体成功进行了转化,转化得到的原生质体在带有潮霉素抗性平板上长出,转化率为3–4/μgpSB130NG-LZ8+107个原生质体。转化子通过PCR检测和荧光定量PCR检测,获得LZ-8在灵芝中的过表达。
基金：吉林省重点科技攻关项目(20150204027NY)~~；
关键词：灵芝; 双T-DNA载体; 目的基因LZ-8; PEG转化法; 荧光定量PCR;