嗜热真菌多糖单加氧酶的克隆表达及氧化产物初步鉴定

【作者】陈铭 耿志刚 刘宁 李多川
【机构】山东农业大学植物保护学院菌物学系
摘要：多糖单加氧酶(Polysaccharide monooxygenases,PMOs)是一类含铜氧化酶,在还原型辅因子(如维生素C)存在下可使纤维素分子氧化降解,在纤维素的酶解中起重要作用。本研究克隆5个嗜热真菌PMOs基因,构建p PICZαA-PMO表达载体,电转毕赤酵母GS115进行真核表达,经镍柱纯化获得重组蛋白后对其氧化活性进行探究。用5个PMOs分别处理磷酸膨胀纤维素(PASC),薄层层析法(TLC)鉴定酶解产物主要为纤维二糖到纤维六糖;飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)鉴定结果显示:PMO0810为C4或C6氧化,PMO2033、PMO0154、PMO4983既有C1氧化也有C4或C6氧化,PMO3424未检测到相应的氧化裂解峰。
基金：国家高技术研究发展计划(2012AA10180402)； 国家科技支撑计划(2015BAD15B05)； 国家自然科学基金(31571949)~~；
关键词：多糖单加氧酶; 嗜热真菌; 氧化裂解; 飞行时间质谱;