【作者】陈坚 翁伯琦 陈彬 雷锦桂 朱炳耀 王义祥 杨志敏 江枝和
【机构】福建省农业科学院生物技术研究所福建省农业科学院农业生态研究所福建省农业科学科院土壤肥料研究所
【摘要】根据链霉素磁珠和生物素特异结合的特性,用生物素标记的二聚核苷酸重复序列探针从巴氏蘑菇的基因组中分离微卫星序列。将结合于链霉素磁珠上的标记探针同两端连接已知序列人工接头的巴氏蘑菇DNA酶切片段杂交。洗脱未杂交DNA片段后,用磁珠富集的片段建立微卫星文库。挑取522个菌落用对应重复序列为引物进行PCR筛选,得到48个阳性克隆,经测序有32个菌落含微卫星序列。微卫星富集效率为阳性克隆数的67%,总克隆数的6%。除去重复或无效的微卫星序列,在设计出的12对用于鉴别85个巴氏蘑菇的Co60辐射变异株微卫星引物中,有4对引物总共扩增出明显的变异菌株17个。证明有些微卫星位点可用于巴氏蘑菇辐射变异品种的指纹筛选与鉴别。
【基金】福建省科技厅项目(Nos.2002N047,2008N0026)； 国家科技支撑计划项目(No.2012BAD14B15)；
【关键词】简单序列重复; 链霉素磁珠; 生物素标记探针; 担子菌门; 分子标记;