【作者】乔宇 毛爱军 何永志 刘伟丰 董志扬
【机构】中国科学院微生物研究所中国科学院微生物研究所 北京100080
【摘要】采用外显子拼接的方法,以里氏木霉Trichoderma reesei基因组 DNA 为模板,克隆出内切-1,4-β-D-葡聚糖酶II基因egl2的全编码序列,将其插入巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris表达载体pPIC9K中,并位于α-因子信号肽序列的下游,获得重组质粒pQY2025。重组质粒线性化后用电穿孔法导入毕赤酵母Pichia pastoris菌株GS115中,经大量筛选,获得高效分泌表达内切葡聚糖酶II的毕赤酵母工程菌株Gp2025。用甲醇诱导培养基进行摇瓶发酵,培养基中内切葡聚糖酶II的活力可达1573.0U/mL,同时对重组内切葡聚糖酶II的性质进行了初步研究。
【基金】国家“863”计划(2001AA214151)； 中国科学院知识创新方向性课题 (KJCX2-SW-206-1)；
【关键词】纤维素酶; 分泌表达; 应用;
图 3 分泌表达的重组内切葡聚糖 重组毕赤酵母工程菌株