2.二级摇瓶菌种
为了扩大种源及缩短种子培养周期、二级种可采用摇瓶液体培养。
培养基配方成分同母种培养基不加琼脂。
将液体培养基分装入250ml盐水瓶中，每瓶装入培养液100ml，瓶口用塑料薄膜封好（1公斤/厘米2），灭菌40分钟。
将培养成熟的母种，在无菌条件下用接种钩接入盐水瓶培养基中，接种量，1支试管斜面菌种接4-6瓶为宜。
接完菌的盐水瓶培养在摇床上，室温控制在20-22℃，振荡培养4-5天，待形成菌球，培养液变清，即可使用。
3.罐头瓶栽培
培养基：小麦粒、磷酸二氢钾、硫酸镁、蛋白胨、维生素B1等。
方法：每个罐头瓶装小麦粒30g、加营养液45-50ml、瓶口用聚丙烯薄膜封好，外用皮圈扎口，放置（1公斤/厘米2）压力下，灭菌50-60分钟，取出后放入接种室备用。
接种：用连续注射器接种，将摇瓶菌种用无菌水稀释，每瓶菌种可接200瓶，方法是1人拿菌种瓶，另一人往培养基中扎破塑料膜注射，每瓶注射5ml菌液，工人操作1小时可接种1000瓶左右，接完种罐头瓶移入培养室的培养架上进行培养。
培养与采收：培养室温度控制在20-22℃之间，大约在15天左右菌丝长满培养基，虫草菌丝为雪白色不呈絮状。这时给予足够的光照，培养基则很快转成黄色。保持室内空气新鲜，虫草子实体在密封的瓶中，仍能正常生长，因此，为减少瓶内水分蒸发无需去掉封口薄膜，只需在薄膜上扎几个眼即可。40天以后开始长草芽，当虫草子实体长到瓶口肩部，表面密生许多突起的小疣（子囊壳）即可采收，采收时打开瓶口用镊子取出子实体，整齐排放在竹帘上阴干、装入塑料袋封存。
