CTAB法提取食用菌DNA

参考：王关林，方宏筠主编，植物基因工程[M].第2版，北京：科学出版社，2002，742-744.

1)        取1克菌丝放入研钵，加入液氮迅速研磨成粉末，转入7 mL的离心管，加2.5mL 65℃预热的抽提液（2 %(m/v)CTAB，100m mol/L Tris-HCl PH8.0，20mmol/L EDTA PH8.0，1.4mol/L NaCl），加巯基乙醇50μl,震荡,使蛋白质变性沉淀；

2)        65℃水浴1 h，每隔10 min振荡1次，加入2.5 mL的氯仿/异戊醇(24/1)混匀，除去蛋白质；

3)        8000 rpm,4℃离心10 min,取上清；

4)        加1/5体积65 ℃预热的CTAB/NaCl混匀，加入2.5 mL的氯仿:异戊醇(24:1)混匀；

5)        10000 rpm, 4℃离心10 min，取上清，加入2.5 ml的CTAB沉淀液，颠倒,混匀。65℃水浴1.5h至沉淀可见；

6)        12000 rpm,4℃离心10 min后，去除上清液,用0.5ml无菌水溶解沉淀10 min；

7)        加入0.25 mL饱和酚和0.25 mL氯仿：异戊醇（24:1）,混匀；

8)        12000 rpm，4℃离心10 min，取上清，加入2倍体积预冷的无水乙醇，混匀，-20 ℃冰箱放置30 min；

9)        12000 rpm，4℃离心10 min；弃上清，加70％乙醇洗涤沉淀2次，自然风干，再加100μlTE溶解，-20 ℃保存备用。